布鲁氏杆菌病

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绵羊作为单胎动物,部分品种却具有多胎遗传特性。其中,FecB基因是影响绵羊繁殖力的关键因素。澳大利亚在年左右选育的携带此基因的绵羊群体产羔数比未选育的群体高30%。研究表明,FecB基因来源于BMPR-IB位点突变,增加绵羊的排卵数和产羔数。携带一个突变拷贝的绵羊排卵数和产羔数分别增加1.3-1.6个和0.9-1.2只,而两个拷贝数则分别增加2.7-3.0个和1.1-1.7只。湖羊、小尾寒羊等多个品种携带此基因,其杂交后代也表现出与繁殖率显著相关的特性。基因型频率中,纯合型(BB)产羔数最多,杂合型(B+)次之,野生型(++)最少。例如,小尾寒羊和湖羊的产羔率分别高达%和%,其杂交后代中,多胎FecB基因纯合型和杂合型母羊个体的产羔率分别为约%和%。

通过多胎基因检测,可区分纯合型、杂合型和野生型种羊,进而实现精准整群,提高繁殖力,提升肉羊业生产水平和科技含量。此举能节约成本,提升产羔率,降低引进成本,减少饲养管理开支;还能增收增效,提高经济效益,缓解羊肉价格上涨。多胎基因检测技术的应用和实施,为肉羊养殖及加工企业带来更多羊源,满足市场需求。

尚睿生物绵羊多胎基因检测

根据FecB基因的核苷酸序列设计两对特异性扩增引物,建立了基于荧光qPCR进行FecB突变分型的方法。该方法为我公司研发团队自行研发成果,相关文章已发表于国内外相关期刊。本试剂盒旨在为用户提供快速、高效、精准检测FecB突变的荧光qPCR试剂。试剂盒采用全预混方式,操作简单便捷,客户只需准备好待检测样本即可配制反应体系上荧光定量PCR进行反应。试剂性能稳定,有很好的基因分型特异性和灵敏度。

试剂盒由两组反应液(FecBBufferA、FecBBufferB)、血液基因组粗提裂解液、阳性对照组成。

试剂盒应放入-20℃保存,血液基因组粗提裂解液也可4℃条件下保存。

1样品采集

1.1绵羊个体选择

多胎基因检测对象主要为绵羊个体,不针对山羊样品进行检测;要求被检测的公母羊个体健康,无人畜共患疾病(如结核、布鲁氏杆菌病等);大、小羊只常年均可采样进行送检。

1.2样品采集

用含抗凝剂的采血管采集血液样品3-4mL,将血液样品颠倒混匀6-8次,确保血液与抗凝剂充分混合、不发生凝血;记录羊耳标号和对应的血样号,不同样品之间不能互相污染;样品采集后及时放入-20℃保存;4℃条件下运输,24h内到达不影响检测结果。

2多胎基因检测

被送检样品要求样品号标记准确、字迹清晰;采样管上的号应与记录号一致;样品保存完好,无破损和渗出;无变质、降解情况发生。

2.1血液基因组提取

1)取待检血液10μL到μLPCR管。

2)向装血液管中加入μL血液裂解液,涡旋混匀后离心收集液体到管底。

3)将管放置金属浴中65℃反应3min后进行95℃3min。

4)离心3)中反应液至少2min,上清即为qPCR血液粗提模板。

5)若需保存上清反复使用,可吸取上清到新的μLPCR管中-20℃保存一周内使用。

2.2qPCR反应体系的配制

1)室温解冻FecBBufferA/B,使用前颠倒混匀避免涡旋产生气泡,瞬离。

2)一个血液样本或阳性对照及NTC需要配置A/B两个反应。

3)阳性对照主要用于证明体系基因分型功能正常,NTC用于监控反应体系有无待检基因模板污染。

4)冰上配制以上反应体系后,混匀,瞬离;待上机反应

2.3qPCR反应程序

注意事项:qPCR结束后避免反应管开盖导致扩增产物污染环境最终导致后续测试实验无法正常判断实验结果。

2.4结果判定

当Ct-A-Ct-B≤-5时,基因型判定为野生型。

当-1.5≤Ct-A-Ct-B≤1.5时,基因型判定为杂合型。

当Ct-A-Ct-B≥5时,基因型判定为突变纯合型。

如若出现待测样本Ct-A和Ct-B值均大于28,或其中一个未出现读值时将无法做出准确的基因型判定,需重新处理样本进行重复基因分型检测。

注:NTCCt值在30以上提示体系污染可控,如若Ct值在30以下需注意排除场所污染,否则无法确保实验结果准确性

二、产品优势

1.高通量自动化工作站及核酸提取仪,可实现大规模筛查,降低成本,提高效率;

2.检测特异性高、检测灵敏度高;

3.操作简便、检测周期短;

4.可对高繁种畜进行早期选择,提高繁殖效率,在短时间内快速提高群体产羔性状;

5.可以现场检测,解决目前送测序公司检测周期长、成本高、易错乱的痛点。

三、服务方案

根据不同养殖场和代理商规模及需求,我们提供完善的个性化的一站式“检测+”服务,即检测+移动式检测设备/自建实验室/送样+育种指导+先打后补申报+净化场申报+……。

实验室人员和环境要求:

实验室专职检测人员应不少于1人,检测技术人员均应经过专业技术、相关法律法规知识培训。

环境要求:建筑面积不少于20㎡;实验室的设计应便于清洁,地面平整、防滑,易清洁、不渗水。墙面光滑平整;实验台、柜及设备之间的空间应便于清洁;实验台表面不透水,耐酸、碱、有机溶媒,耐热;门、窗户密闭性良好。

3.送样检测

样品采样——样品寄送(第二天送达)——检测分析(2个工作日)——报告出具——电子版报告发送。

4.育种指导

由国内外知名羊业遗传育种专家组成的专家团队,根据客户需要,提供性能测定、品种选育、杂交改良、核心群建立等完整的育种指导方案。

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